薄层扫描法测定芪黄口服液中黄芪甲苷的含量

作者:杨书良

    芪黄口服液由黄芪、黄精、穿山龙、益母草等组成，健脾补肾，活血化瘀、清+热利湿，用于治疗气阴两虚型的慢性肾炎。黄芪为君药，其主要活性成分黄芪甲苷具有明显的补气益肾作用。本实验采用薄层扫描法测定黄芪甲苷的含量，作为质量控制指标。
    1 仪器与试药
    岛津CS-910双波长薄层扫描仪；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所)；硅胶G(薄层色谱用，青岛海洋化工厂)；硅胶G预制板(青岛海洋化工厂分厂)；试剂均为分析纯；芪黄口服液(自制)。
    2 方法与结果
    2．1 薄层扫描条件：选用510nm为测定波长。由于薄层图谱上黄芪甲苷斑点与相邻斑点距离较近，不适于锯齿扫描，同时，因其斑点圆整、清晰，故选用线性扫描。展开剂：氯仿-甲醇-1O％氢氧化钠水溶液(65：35：1O)。显色剂：1O％硫酸乙醇溶液。测定方式：反射法、线性扫描。
    2．2 供试品溶液的制备：精密吸取本品10mL，置分液漏斗中，以氯仿-正丁醇(2：1)萃取4次，第1次40mL，以后每次30mL，合并萃取液，置水浴蒸干，残渣加2%氢氧化钾甲醇溶液溶解，并置水浴回流提取2h，然后再置水浴蒸干，残渣加水30mL溶解，并转移至分液漏斗中以氯仿-正丁醇(2：1)萃取4次，第1次50mL，以后每次30mL，合并萃取液，用1%磷酸二氢钾溶液5OmL洗涤，弃去磷酸二氢钾溶液，洗涤后的萃取液置水浴上蒸干，加乙醚脱脂3次，每次5mL，弃去乙醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，转移至2mL量瓶内，稀释至刻度，摇匀，即得。
    2．3 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品约1mg，精密称定，加甲醇制成1mg／mL的对照品液。
    2．4 线性关系考察：精密称取黄芪甲苷5mg，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度。分别精密吸取1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μL点于同一硅胶G板，以氯仿-甲醇-1O%氢氧化钠水溶液(65：35：1O)下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1O％硫酸乙醇溶液，在ll0℃烘5～7 min，至斑点清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，进行扫描，测定积分值。以积分值为纵坐标，黄芪甲苷质量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=0.0342+0.9920 X，r=0.9991。结果表明：黄芪甲苷点样量在0.5～5μg与积分值线性关系良好。
    2．5 精密度试验：在同一薄层板上点5个相同量的黄芪甲苷对照品溶液，测定，结果积分值的RSD为1.6%；在5块不同薄层板上点相同量的黄芪甲苷对照品溶液，测定，结果积分值的RSD为2.7％。
    2．6 稳定性试验：以1O%硫酸乙醇溶液喷雾，在ll0℃烘5～7min，显色后每隔30min扫描一次，结果黄芪甲苷含量的RSD为2.8％(n=5)，表明供试品溶液在2h内基本无变化。
    2．7 回收率试验：精密吸取已知含量的芪黄口服液5份，每份1mL，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(1mg／mL)1 mL，依法测定，计算回收率。结果平均回收率为96.32%，RSD=1.12%(n=5)。
    2．8 样品的测定：精密吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，分别交叉点于同一硅胶G板，测定，结果批号1，2，3，4，5样品中黄芪甲苷含量分别为1.32，1.43，1.36，1.38，1.40mg／mL (n=3)。
    3 讨论
    为了有效地提取黄芪甲苷，曾选用氯仿-甲醇(1：1)、水饱和正丁醇等溶剂提取，通过大孔吸附树脂、中性氧化铝柱及中性氧化铝-活性炭柱处理，结果均不理想。因黄芪中所含黄芪皂苷有多种，其中几种与黄芪甲苷有相同的母核结构，经选用氯仿-正丁醇(2：1)萃取后，再用2%氢氧化钾甲醇溶液皂化处理，薄层色谱斑点清晰，消除了一般皂苷成分在薄层扫描测定时常见的干扰现象，重现性好。