毛细管电泳法(HPCE)测定克心痛滴丸中阿魏酸的含量

作者:闰滨，马山，张秋红，田景振

关键词：毛细管电泳；克心痛滴丸；阿魏酸；含量测定
摘要：目的：建立毛细管区带电泳(Capillary Zone Electrophoresis，CZE)测定克心痛滴丸(麝香、川芎、元胡等)中川芎的有效成分阿魏酸(Ferulic Acid，下文简称为FA)的含量。方法：以对硝基苯甲酸(p-Nitrobenzonic Acid下文简称为p-NBA)为内标，30 mmol/L 硼砂缓冲液(1 mol/L NaOH调pH值到9．45)为电泳介质，20PSI气压下进样5秒，定电流50A分离20 min，电泳温度20℃ ，二极管阵列PDA检测器检测，应用295 Bin检测波长。结果：阿魏酸的浓度在4 mg/
L～264 mg/L 范围内，与峰面积呈线性关系，RSD为1．71％( =6)，回收率为100．47％ ±2．1％。结论：该方法方便快速、准确可靠，可用于对该滴丸中阿魏酸含量进行分析。
中图分类号：R927。2 文献标识码：A 文章编号：1001-1528(2005)01-0037-02

Quantitative analysis of ferulic acid in Kexintong Dripping Pills by HPCE
YAN Bin 。MA Shan ， ZHANG Qiu．hong ， TIAN Jing—zhen。
(J．Shaadong University ofTraditional Chinese Medicine，．~nan 250014，China；2．Jinan Institutefor Dn,g Control，Jinan 250001，China)
KEY WORDS：capillary electrophoresis；Kexintong Dripping Pills；femlic acid；quantitative analysis
ABSTRACT：AIM ：To establish a quantitative analytical method of femlic acid in Kexintong Dripping Pills(Moschus，Rhizoma Chuaxiong，Rhizoma Corydalis，etc。)based on the capillary zone electrophoresis。METHODS：P-Nitrobenzoic acid was adopted as the intemal substauce with a 30 mmol/L borax solution at equal electrophoresis current of 50 p,A，detection wavelength at 295 nm，uncoated fused silica capillary of 75 μm ×50 cm，temperature at 20 oC．Sample Was injected for 5 S at pressure of 20PSI。RESULTS：Good linearity was showed in the concentration range of 4～264 mg/L．RSD was 1。71％(n=6)，and the recovery was 100。47％ ±2。1％。CONCLUSlON：The result indicates the proposed method is convenient，rapid，accurate and reliable，it is a proper method for the quantitative analysis of ferulic acid in Kexintong Dripping Pills．

    克心痛滴丸是山东中医药大学研制的速效纯中药制剂，能有效地防治冠心病、心绞痛。方中主要含有麝香、川芎、元胡等中药，其中川芎辛温走串，具行气开瘀活血止痛之功效。阿魏酸是其有效成分之一，能有效抑制血小板聚集，并有抗氧化和抗自由基的作用。阿魏酸的测定方法，历来以薄层色谱和高效液相色谱 为主。本文采用毛细管区带电泳法建立了克心痛滴丸中阿魏酸的定量测定方法，实验表明，有高效、经济、重现性和回收率好的优点。
1 仪器与试药
    P／ACE 5500型高效毛细管电泳仪(美国Beckman公司)；数据处理使用Beckman P／ACE Station化学工作站，熔融石英毛细管柱75 ttm×57 cm(有效长度50 cm，未涂层，河北永年光导纤维厂)。阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所)；对硝基苯甲酸(P．NBA化学纯，上海五联化工厂)；克心痛滴丸(山东中医药大学药剂教研室提供)；水为去离子水。其他均为分析纯试剂。
2 电泳条件
    电泳溶液为30 mmol/L 硼砂溶液，以NaOH调节pH值为9．45，20PSI气压下进样5秒，定电流50 A分离20 min，电泳温度20℃，二极管阵列PDA检测器检测，应用295 nm检测波长。
3 标准曲线和线性范围
    精密称取5 mg的阿魏酸，用90％ 的甲醇(含5％冰醋酸)定容于25 mL的量瓶中，得浓度为212mg/L 的对照品的贮备液。精密量取贮备液0．1．0．2，0．5，1，1．5，2，2．5 mL置5 mL量瓶中，各加入1mL对硝基苯甲酸内标液，定容至5 mL备用。将标准液依次进样，按上述电泳条件测定，以阿魏酸峰面积与对硝基苯甲酸内标峰面积之比为横坐标，以阿魏酸浓度为纵坐标，绘制标准曲线。阿魏酸的浓度在4～264 mg/L 范围内，与峰面积呈线性关系。
4 样品溶液的配制和测定
    精密称取克心痛滴丸约0．155 g 3份，用pH为l0的氢氧化钠碱液40 mL加热回流提取30 min，提取液调pH值为3～4，用乙醚(20，20，20 mL)提取3次，合并乙醚提取液，水浴挥干乙醚，残留物用甲醇转移至5 mL量瓶中，0．45 m微孔滤膜滤过并定容38至刻度备用。取3个平行供试样品各6份，实验条件与制定标准曲线法相同，测得克心痛滴丸中阿魏酸含量为(1．30±0．02)mg/g．RSD为2．11％。
5 缓冲液浓度对分离的影响
    通过对60 mmol/L，40 mmol/L，30 mmol/ L 硼砂缓冲液的对比，发现随着浓度增大，区带反而增宽，而分离度增加不明显，分离时间缩短也不明显，由此实验最终选30 mmol/L 硼砂进行，此结果与陈勇等的结果一致 。
6 精密度试验
    当标准溶液中阿魏酸浓度为42．4μg/mL时，阿魏酸峰面积与对硝基苯甲酸内标峰面积的比
值的RSD为1．71％ ，凡=6。
7 回收率试验．
    取已测知含量的样品5份，精密加入一定量的阿魏酸溶液．测定回收率。见表l。
8 讨论
    关于电泳操作模式的选择，进行了定电压与定电流两种模式比较，结果表明定电流的分离模式保留时间等各项分离指标较定电压为好。阿魏酸是有机弱酸，HPLC法分离迅速，但峰展宽效应明显；薄层色谱法操作比较烦琐，且系统误差较大。毛细管电泳法分离测定阿魏酸实验操作简便，进样量小，分离完全，峰形正常。线性范围较宽，重现性好，为中药制剂中阿魏酸的质量控制提供了新的实验手段。从电泳图谱可以发现，毛细管电泳对克心痛滴丸中各组分均有良好的基线分离，提示对于其他组分定量分析的可能性。阿魏酸对电渗流有明显的影响，表明在保留时间波动较大，而当进样溶液中不含有阿魏酸时，保留时间波动减小，估计与阿魏酸的羧基影响毛细管石英内壁Si．OH的化学性质有关。加入内标对于改善毛细管电泳的准确度是极为有利的，本实验在不计算内标的回归方程中，r值为0．994，而计算内标的回归方程r=0．9997(凡=7)。不计算内标的阿魏酸峰面积精密度考察的RSD高达32．24％ ，而计算内标的RSD：1．71％o(凡=6)。可见二者相差巨大。所以内标在毛细管电泳定量研究中是必要的，而且在采用合适的内标之后，其精确程度与高效液相色谱在同一水平上，如果不用内标，务必控制条件使偏差在可接受范围内。


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