高效毛细管电泳法测定蒲公英中咖啡酸的含量

作者:晏媛，许重远，陈志良，郑 萍，郭 丹

摘要 目的：测定蒲公英药材中咖啡酸的含量一方法：采用高效毛细管电泳法。电泳条件为：石英毛细管柱(78μm×60cm)；运行缓冲液为20 mmol／L的硼砂溶液(25℃时pH=9．18)；分离电压12 kV；进样时间为5 ；温度为25℃ ，检测波长为313 am。结果：咖啡酸在l0～100 ml范围内呈良好的线性关系(0．9992) 平均回收率分别为98、3％ 、94、8％ 、96、5％ ；RSD分别为1．9％ ，2．3%、1、6％(n=3) 结论：毛细管电泳法用于测定蒲公英中咖啡酸的含量是可行的。
关键词 蒲公英 咖啡酸 高效毛细管电泳

    蒲公英为常用清热解毒的中药，主治乳痈、疔疮肿毒、瘰疬、目赤、咽痛、湿热黄疸和热淋涩痛等。药理实验表明蒲公英具抗菌消炎、利胆保肝和免疫促进作用。笔者采用HPCE法测定蒲公英中咖啡酸的含量，现报道如下。

1 仪器与试药：Waters高效毛细管电泳仪，Millennium 32色谱工作站，石英毛细管(75μm×60 cm，Waters公司)，超纯水器(Mill—Qplus USA)，SK5200LH型超声波仪(上海科导超声仪器有限公司)，TGL-16B离心机(上海安亭科学仪器厂)。咖啡酸对照品(供含量测定用，批号：885．200001)由中国药品生物制品检定所提供。蒲公英药材为市售品(产地甘肃)，购自广东省药材公司并经鉴定为菊科植物蒲公英Taraxacttm mongolieum Hand．Mazz．的干燥全草。硼砂、氢氧化钠、甲醇、乙酸乙酯、甲酸、乙酸等均为分析纯。

2 方法与结果
2．1 分离条件：分离电压为12 kV，极性为正极到负极；进样：5．066 kPa×5 S；检测波长313 nm；运行缓冲液为20 mmol／L硼砂溶液(四硼酸钠1．907 g于25cI=时溶于水并定容至250 ml即得)，pH=9．18，25℃时以pH计测定。每次进样前，均用0．1mol／L氢氧化钠溶液冲洗1 min，纯水冲洗2min，最后用运行缓冲液冲洗毛细管柱3 min，每次分析后用0．1 mol／L氢氧化钠溶液冲洗10 min，水冲洗10min。所用溶液均经0．45μm纤维树脂膜过滤。在上述分离条件下，蒲公英中咖啡酸的迁移时间约为8 min，与其它成分分离较好(见图)。

2．2 溶液制备
2．2。1 咖啡酸对照品溶液：精密称取咖啡酸对照品5 mg，用甲醇溶解并定容至25 ml，然后精密量取0．5、1、2、3、4、5 m1分别置10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得。
2．2．2 蒲公英样品溶液：蒲公英样品60℃干燥后粉碎成细粉，过100目筛。精密称取生药粉末2 g，用95％ 乙醇渗漉，收集渗漉液100 ml，回收乙醇，浓缩物混悬于10 ml水中，置分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取3次，每次15 ml，合并乙酸乙酯液。减压回收乙酸乙酯至干，残渣用甲醇溶解并定容至10 ml，以0．45μm滤膜过滤。
2．3 精密度试验：取40μg／ml的咖啡酸对照品溶液按2．1项下所述电泳条件连续进样5次，分别计算咖啡酸的峰面积，RSD为0．83％ ，表明仪器精密度良好。
2．4 线性关系考察：分别取10、20、40、60、80、100g／ml的咖啡酸对照品溶液，按2．1项下所述电泳条件分别进样，以咖啡酸浓度( m1)为横坐标，咖啡酸的峰面积为纵坐标，回归得方程：Y：1002．45X-327．87，r=0．9992。表明在10～100μg／ml范围内线性关系良好。
2．5 重现性试验：精密称取同一批蒲公英样品粉末2 g共5份，照2．2．2项下处理后分别按2．1项下所述电泳条件进样分析，计算峰面积，得咖啡酸的平均含量为0．34 mg／g，RSD为1．8％ ，表明该法重现性好
2．6 稳定性实验：取蒲公英样品溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h进样，测定咖啡酸峰面积，结果RSD=1．3％ (n=6)：
2．7 加样回收率试验：取已测咖啡酸含量的蒲公英样品9份，分别加入咖啡酸对照品50 g、100 g、200 g，按2．2．2项方法制成溶液，测定其回收率(n= 3)，结果平均回收率分别为98．3％ 、94．8％ 、96．5％ ；RSD分别为1．9％ 、2．3％ 、1．6％ 。
2．8 样品测定：将蒲公英药材按溶液制备项下处理后，按2．1项下所述电泳条件进样分析，3批蒲公英药材中咖啡酸含量分别为0．34 mg／g、0．31 mg／g、0．30 mg／g。