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微量血凝试验的常见问题
1、1抗原效价和血清抗体滴度发生偏差而产生实验误差。
1、2凝集板出现跳孔现象。
1、3凝集不明显,无法判定结果。
2、问题的原因及应对措施
2、1被检血清fu bai变性。血样采集后要及时分离血清,分离后即时测定或放置在4℃冰箱内保存,不可过久,要力求新鲜。
2、2缓冲液配制时间过长,PH值发生变化,使凝集不明显。缓冲液(PBS)尽可能现配现用,浓度和酸碱度要准确,可用HCL和NAOH液调节酸碱度,并用PH试纸进行测试到PH值合适为止。如果用生理盐水代替缓冲液,要使用新生产、新开瓶的生理盐水。
2、3病毒悬液和红细胞悬液在使用前没有摇匀,加入时浓度高低不一,人为造成误差。因此抗原和红细胞使用前一定要摇匀,保证每一孔中加入的浓度准确一致。
2、4红细胞的敏感性降低。配制红细胞悬液应采集2只以上成年公鸡的血,一般要求用非免疫公鸡,如果用免疫公鸡代替,但应增加洗涤次数和时间,在洗涤红细胞时要去除表面的白细胞膜否则将影响红细胞的敏感性。
2、5在使用微量移液器时,液体加入量发生误差。在使用微量移液器时,每个吸头要安装牢固,防止漏气;操作时手压下的力度要均匀,否则移液量就不准,造成结果不准确。移液管嘴浸入液面下的深度要力求一致,不可过深,移液器管嘴插入较深,留在管嘴外的液体也滴入孔内,吸取量增大,对抗体滴度发生影响。如果插入过深时,待管嘴撤出液面后斜贴在容器壁上,淌走多余的液体再滴加入凝集板孔中。
2、6在稀释血清时,产生气泡。倍比稀释血清时,在吸取第一孔时要先按下移液器,再插入凝集板孔,吸取后加入第二孔,在反复抽取过程中,移液器滴头不要离开液面,防止产生气泡,造成移液量不准。
2、7在使用移液器滴加液体时,有时会将管嘴与凝集板孔相接触,造成污染。尤其是在加入红细胞悬液时,孔内已有稀释液、抗原、血清等,如果管嘴接触到孔内混合液,会造成各个孔内液体相互污染。所以在使用移液器时,一定要保持加样器管嘴与凝集板孔间的距离,以保证每个凝集孔内液体数量和浓度准确。
2、8在凝集过程中振动凝集板。有些操作者在实验过程中,急于想知道结果,将凝集板随时取放,使凝集受到影响。因此在静置过程中一定要有耐心,不要急于求成,等时间到时再看结果,才能保证实验的准确性。
2、9凝集板不干净。微量血凝板的清洗,对试验结果有很大的影响。尤其是使用过的凝集板,要按程序清洗干净。一般的清洗程序是:试验完毕后,立即将凝集板用自来水反复冲洗,再用洗涤剂的温水溶液浸泡30分钟,并在洗涤剂溶液中以棉拭子刷洗凹孔及板面,待反应板干燥后,放到2—3%浓度的盐酸中浸泡24小时以上,捞出用自来水冲洗多次,最后以蒸馏水冲洗2—3次,在37度温箱中烘干备用。如果使用的是一次性凝集板,要保持板面及凹孔的干净
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judge0zz8 最后编辑于 2007-11-29 16:59:39