[经验交流] 蔡司LSM 510 Meta MK4 激光扫描共聚焦显微镜

评论大纲：
型号：LSM 510 Meta MK4 激光扫描共聚焦显微镜
优点：具有3个独立针孔的光谱设备，每个PMT具有一个针孔
缺点：对于提交到PMT的单个信号缺少灵活性
概要：非常灵敏，有很好的光谱分辨率


产品整体评论：
在我们试验室，日常用荧光标记做蛋白靶细胞的显像和定位时，使用激光扫描共聚焦显微镜。我们最常用的是双通道或三通道标记。所以对于我们，一台性能良好的设备能够使每个荧光探针最高敏度的显像，精确辨别不同的荧光标记，再现我们的定量结果，这些至关重要。同时，在多标记试验中存在串色，应最大限度的降低。这就是为什么我经常关注共聚焦成像领域的技术改进，以及寻找显微镜的一种技术状态来适应我们的需要。

　　很长时间以来，我研究蔡司共聚焦显微镜LSM 510 Meta MK4的性能。机器可以配备4种激光：半导体激光器（405nm），氩离子激光器（458, 477, 488和514nm），半导体激光器（561nm）和氦－氖激光器（633nm）。具有一个光谱检测器META，2个常规检测器和一个透射光检测器。这个系统配合一款倒置显微镜Axio Observer Z1，经由图像获取软件在Windows Vista系统中操作。

　　首先，需要说明的是Meta MK4（第4代）是LSM 510的最新版。它已扩展到能够用实时电脑来控制多个扫描系统和成像方式（例如：Ca成像检测试验中，在采图的同时，构造比率曲线）。

　　这款机型提供给多通道荧光分析一种很有趣的配置，因为它同时拥有META光谱检测器（一个32阳极PMT，单次扫描就能采集全光谱上各波长的系列图像），和2个独立的常规检测器。因此，您能够设定光谱检测范围以最适合您的标记，同时使用另外两个检测器来最大化从其他标记得到的信号。然而，需要提及的是二色棱镜会对标记合并产生一些限制。因此，如果您做三通道荧光标记，经常是最短波长的发射光被发送到第一个（常规）检测器，那个（或那些）中间波长的光被发送到META检测器上，最长波长的发射光将被发送到第三个（常规）检测器上。

　　另外，相对其他共聚焦显微镜的显著优势是3个针孔的存在（大多只有一个针孔）：每个荧光检测器配一个针孔。这些针孔的直径可依据捕捉荧光的波长自动校正，改进了直径的特异性，使信号的获取最优化。然而，也存在一个缺点：当您向光谱检测器发送的信号多于一个时，针孔直径将是这个检测器获取的标记的平均直径。

　　总之，对于试验的重复性，所有的荧光标记合成都适用于蔡司LSM 510 Meta MK4，以上提到的仅有的局限性将不会妨碍您的试验。您可以信赖这款显微镜的出色效果，并确信它的所有性能值得拥有蔡司的美誉：Z轴步进10nm，卓越的光学性能，实时的数据管理，友好的采图软件，可获得高达8192x8192像素的分辨率，并有多种软件模块供您选择。


作者信息：
  　Alexandra Khomitch-Baud
    Scientist
    Cellular Imaging Department
    Biovays
    France