血液样品
采集检验样品是动物检疫工作的重要内容。采样的时机是否适宜,样品是否具有代表性,样品处理、保存、运送是否合适及时,与检验结果的准确性、可靠性关系极大。采集检验样品时,需要符合以下规定:
1. 适时采样 根据检疫要求及检验项目的不同,选择适当的采样时机十分重要。样品是有时间要求的,应严格按规定时间采样;有临诊症状需要作病原分离的,样品必须在病初的发热斯或症状典型时采样,病死的动物,应立即采样。
2. 合理采样 按照检疫规定要求,须严格按照规定采集各种足够数量的样品外,不同疫病的需检样品各异,应按可能的疫病侧重采样。对未能确定为何种疫病的,应全面采样。
3. 典型采样 选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的样品,如有并发症,还应兼顾采样。
4. 无菌取样 采集检验样品除供病理组织学检验外,供病原学及血清学等检验的样品,必须无菌操作采样,采样用具、容器均须灭菌处理,尸体剖检需采集样品的,先采样后检查,以免人为污染样品。
5. 适量采样 采集样品的数量要满足检疫检验的需要,并留有余地,以备必要的复
3检使用。
6. 样品处理 采集的样品应一种样品一个容器,立即密封,根据样品的性状及检疫检验要求不同,作暂时的冷藏、冷冻或其他处理。[冻结方法:可将样品放入-30℃冰箱内冻结,然后再装入有大小冰块或干冰的冷藏瓶(箱)内运送,亦可将装入样品的容器放入隔热保温瓶内,再放入冰块,然后按100g冰块加入食盐约35g,立即将隔热瓶瓶口塞紧。瓶内温度可达-21℃左右]。供细菌学检验或血清学检验的样品,冷藏送实验室即可。装样品的容器应贴上标签,标签要防止因冻结而脱落,标签标明采集时间、地点、号码和样品名称,并附上发病、死亡等相关资料,尽快送实验室。
7. 安全采样 采样过程中,须做好采样人员的安全防护,并防止病原污染,尤其必须防止外来疫病的扩散,避免事故发生。
8. 样品包装 装载样品的容器可选择玻璃的或塑料的,可以是瓶式、试管式或袋式。容器必须完整无损,密封不漏出液体。装供病原学检验样品的容器,用前彻底清洁干净,必要时经清洁液浸泡,冲洗干净后以干热或高压灭菌并烘干。如选用塑料容器,能耐高压的经高压灭菌,不能耐高压的经环氧乙烷熏蒸消毒或紫外线距离20cm直射2h灭菌后使用。根据检验样品性状及检验目的选择不同的容器,一个容器装量不可过多,尤其液态样品不可超过容量的80%,以防冻结时容器破裂。装入样品后必须加盖,然后用胶布或封箱胶带固封,如是态样品,在胶布或封箱胶带外还须用熔化的石蜡加封,以防体外泄。如果选用塑料袋,则应用两层袋,分别用线结扎袋口,防止液体漏出或入水污染样品。
9. 送检迅速 样品经包装密封后,必须尽快关往实验室,延误送检时间,常会严重影响检疫结果。因此在送检样品过程中,要根据样品的保存要求及检验目的,妥善安排运送计划。供细菌检验、寄生虫检验及血清学检验的冷藏样品,必须在24h内送到实验室;供病毒检验的冷藏处理样品,须在数小时内送达实验室,经冻结的样品须在24h内送到,24h内不能送到实验室的,需要在运送过程中保持样品温度处于-20℃以下。送检样品过程中,为防止样品容器破损,样品装入冷藏瓶(箱)后应妥善包装,防止碰撞,保持尽可能的平稳运输。以飞机运送时,样品应放在增压仓内,以防压力改变,样品受损。
(一) 病毒检验样品 在动物发病初体温升高期间采集,对于没有症状的带毒动物,一般在进入隔离场后7天以前采样。血样品必须是脱纤血或是抗凝血。抗凝剂可选和肝素或 EDTA,枸橼酸钠对病毒有微毒性,一般不宜采用。采血前,在真空采血管或其他容器内按每10ml血加入0.1%肝素1ml或EDTA20mg,牛、马、羊从颈静脉或尾静脉真空采血,猪从前腔静脉真空采血或用注射器抽取,用量少时也可以从耳静脉抽取,家禽从翅膀静脉或颈静脉用注射器抽取血液。采得的血立即与抗凝剂充分混合,防止凝固;采脱纤血时,先在容器内加入适量小玻珠,加入血液后,反复振荡血液,以便脱云血液纤维,采得的血液经密封后贴上标签,以冷藏状态立即送实验室。必要时,可在血中按每毫升加入青霉素和链霉素各 500-1 000IU,以抑制血源性或采血中污染的细菌。
(二) 细菌检验样品 采血应在动物发病初体温升高或发病期,并未经药物治疗期间采集,血应脱纤或加肝素抗凝剂 (或EDTA或枸橼酸钠),但不可加入抗生素。血液密封后贴上标签,冷藏尽快送实验室,否则须置4℃冰箱内作暂时保存,但时间不宜过久,以免溶血。
(三) 血清学检验样品 全血用真空采血管或注射器由动物颈静脉或其他静脉采集,用作血清学检验的血液不加抗凝剂或脱纤处理。为保障血清质量,一般情况下,空腹采血较好。采得的血贴上标签,室温静置待凝固后送实验室,并尽快将自然析出的血清或经离心分离出的血清吸出,按需要分装若干小瓶密封,再贴上标签冷藏保存备检或冷藏送检。作血清学检验的血液,在采血、运送、分离血清过程中,应避免溶血,以免影响检验结果。中和试验用的血清,数天内检验的可在4℃左右保存。较长时间才能检验的,应冻结保存,但不能反复冻融,否则抗体效价下降。供其他血清学检验的血清,一般不必加入防腐剂或抗生素,若确有需要时也可加入抗生素 ( 每毫升血清加青霉素、链霉素500-1 000IU),亦可加入终浓度为 0.01%硫柳汞、0.08%硫柳汞、0.08%叠氮钠。加入防腐剂时,不宜加入过量的液态量,以免血清被稀释。加入防腐剂的血清可置4℃下保存,但存放时间过长亦宜冻结保存。采集双份血清检测比较抗体效价变化的,第一份血清采于病的初期并作冻结保存,第二份血清采于第一份血清后3-4周,双份血清同时送实验室。
(四) 寄生虫检验样品 因不同的血液寄生虫在血液中出现的时机及部位各不相同,因此,需要根据各种血液寄生虫的特点,取相应时机及部位的血制成血涂片,送实验室。
(五) 常规检验样品 血液需加抗凝剂,防止血液凝固,抗凝剂可用肝素或枸酸钠、 EDTA钠均可,血由静脉采得并与抗凝剂充分混合,尽快送实验室。运输中血浆不可冻结,不可剧烈振动,以免溶血。